準確測定有機化合物的分子結構，對從分子水平去認識物質世界，推動近代有機化學的發(fā)展是十分重要的。采用現(xiàn)代儀器分析方法，可以快速、準確地測定有機化合物的分子結構。在有機化學中應用最廣泛的測定分子結構的方法是四大光譜法：紫外光譜、紅外光譜、核磁共振和質譜。紫外和可見光譜（ultraviolet and visible spectrum）簡寫為UV。

紫外光譜的發(fā)展史：1852年，比爾(Beer)參考了布給爾(Bouguer)1729年和朗伯(Lambert)在1760年所發(fā)表的文章，提出了分光光度的基本定律，即液層厚度相等時，顏色的強度與呈色溶液的濃度成比例，從而奠定了分光光度法的理論基礎，這就是著名的朗伯比爾定律。1854年，杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人將此理論應用于定量分析化學領域，并且設計了第一臺比色計。到1918年，美國國家標準局制成了第一臺紫外可見分光光度計。此后，紫外可見分光光度計經(jīng)不斷改進，又出現(xiàn)自動記錄、自動打印、數(shù)字顯示、微機控制等各種類型的儀器，使光度法的靈敏度和準確度也不斷 提高，其應用范圍也不斷擴大。紫外可見分光光度法從問世以來，在應用方面有了很大的發(fā)展，尤其是在相關學科發(fā)展的基礎上，促使分光光度計儀器的不斷創(chuàng)新，功能更加齊全，使得光度法的應用更拓寬了范圍。

紫外分光光度計工作原理：1、物質的吸收光譜本質上就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會相同。因此，每種物質就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。

2、又因為許多物質在紫外-可見光區(qū)有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法對這些物質分別進行測定（定量分析和定性分析）。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。

3、朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)是光吸收的基本定律，俗稱光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎。當入射光波長一定時，溶液的吸光度A是吸光物質的濃度C及吸收介質厚度l(吸收光程)的函數(shù)。

4、首先確定實驗條件，并在此條件下測得標準物質的吸收峰以及其對應波長值（同時可獲得該物質的最大吸收波長）；再在選定的波長范圍內（或最大波長值處），分別以（不同濃度）標準溶液的吸光度和溶液濃度為橫、縱坐標繪出化合物溶液的標準曲線得到其所對應的數(shù)學方程；接著在相同實驗條件下配制待測溶液，測得待測溶液的吸光度，最后用已獲得的標準曲線方程求出待測溶液中所需測定的化合物的含量。

5、具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結構的有機化合物，根據(jù)在特定吸收波長處所測得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。

紫外分光光度計難點——校正方法：紫外分光光度計的校正方法：分光光度法的最重要的一個物理化學量是吸光度。為了獲得準確的研究結果，準確測得樣品溶液的吸光度是非常重要的。一般，分析結果的不可靠性與偶然誤差和系統(tǒng)誤差有關。偶然誤差影響測量的精密度，可通過足夠數(shù)量測量的統(tǒng)計處理來減少;系統(tǒng)誤差影響測量結果的準確度，可在大體相同實驗條件下，用比較一種物質的準確測量結果，使系統(tǒng)誤差統(tǒng)一起來。而分光光度計的系統(tǒng)誤差(波長校正、分光光度計的慢散光、放大器的線性響應、暗電流和比色皿的光程)和操作誤差(溫度改變、儀器讀數(shù)、操作者的改變、使用物質的純度、稱量和濃度、pH)對測量吸光度的影響是可以檢查和校正的。關于操作誤差，多數(shù)情況下，通過嚴格按操作程序測量、儀器調零、準確稱量等來控制或減少這種誤差的產生。關于儀器的系統(tǒng)誤差，可通過對分光光度計的定期校正來克服，若所需準確度很高的測量，則必須天天校正。

紫外分光光度計難點——讀數(shù)不穩(wěn)定：1、先不放比色皿，看儀器是否漂移。如果不漂移，說明儀器正常。

2、放入空白溶液比色皿調零，讀數(shù)漂移到一定數(shù)值后，取出比色皿看一下，內壁是否有極細小的氣泡。

一般紫外光度計讀數(shù)不穩(wěn)定的根本原因應該有兩類：一類是能量降低，信噪比下降，這個可能性比較大；另一類是信號接收和處理故障。

1、能量降低

（1） 比色皿

如果是在400nm以下波長測量，需使用石英比色皿，假如使用普通玻璃比色皿會吸收大部分的紫外能量。還有比色皿一般有光面和毛面之分，毛面是手捏的，光面是對正光路的。

（2）樣品架：

檢查樣品架是否在正確的槽位上，光是否全部照在比色皿上。方法是把波長設定到550nm左右，這時是比較明亮的黃綠色光，在樣品室內用個小紙片擋下就能看到光斑。這個方法也能檢測可見區(qū)的光源是否正常，濾光盤及波長驅動是否正常。

（3）空白樣品

樣品室不放任何東西對空氣調零，看是否穩(wěn)定。如果穩(wěn)定的話，應該是空白樣品本身吸光度太高了。方法是先對空氣調零，然后把空白樣品放入光路中看讀數(shù)。如果讀數(shù)很大，例如接近3A，則不可用。

（4）光源

先確認分析波長值，一般紫外可見有2個光源，紫外區(qū)用氘燈，可見區(qū)用鎢燈，切換點一般在340nm-400nm。鎢燈光較為明亮刺眼，氘燈光偏青紫色。如果儀器后面有透光窗口可以直接看，如果沒有的話，需要打開外殼，打開燈室罩。光源都是用壽命的，能量變弱或干脆不亮了，要換燈。也有比較小的可能是光源供電電路故障，例如電源老化后可能導致無法正常點亮氘燈。

（5）光路

看光路是否偏了，可以把波長設定到550nm左右，觀察樣品室內有無黃綠色光線，光斑能否正確照在接收器窗口上。確認燈室內光源光斑是否正確照在單色器入狹縫上，確認光路中有無雜物擋住。確認單色器內反射鏡、透鏡、光柵、濾光片等是否發(fā)霉或積滿灰塵，這個需要廠家才能處理。

（6）驅動電路故障

例如濾光盤驅動異常，導致濾光片用錯或者干脆光路被遮擋。一般廠家或專業(yè)人員處理。

2、信號接收和處理故障

接收器（例如光電池或者光電倍增管）、放大電路、AD轉換電路等都有可能。這類問題一般由廠家或專業(yè)人員處理。